Director: Guillermo Alejandro Bavera, Méd. Vet.,
Profesor Titular Efectivo de Producción Bovina de Carne, Depto. Producción
Animal,
Facultad de Agronomía y
Veterinaria, Universidad Nacional de Río Cuarto, Río
Cuarto, provincia de Córdoba, República Argentina
Volver a: Principal > Inseminación Artificial
Catena,
M. (1) y J. Cabodevila (1). 1999. Taurus, 1(3):18-31.
(1) Fac. de Cs.
Veterinarias. Univ. Nac. del Centro de
la Prov. de Bs. As. Campus
Universitario, (7000) Tandil.
Trabajo presentado en el
Simposio Internacional de Reproducción Bovina (UNCPBA), Tandil, 6 de agosto de
1999.
El
resultado de la inseminación artificial (IA) es consecuencia de una serie de
eventos concatenados. Uno de los factores que influye es la calidad
seminal. Si bien no existe ningún
examen in vitro altamente
correlacionado con la fertilidad, hay diversas pruebas de laboratorio que
permiten estimar la calidad seminal, muy útiles cuando son realizadas
correctamente e interpretadas con criterio.
En
la evaluación de semen congelado se tienen en cuenta al menos tres parámetros
básicos: viabilidad Post-descongelación, morfología y número de espermatozoides
con motilidad progresiva por dosis inseminante.
Algunos
investigadores consideran conveniente realizar controles bacteriológicos y/o
virológicos periódicos.
La
IA tiene como objetivos mejorar la calidad genética y también prevenir o
eliminar enfermedades venéreas. Sin embargo la técnica no está exenta de
riesgos, pues puede convertirse en vía de diseminación o en fuente de
propagación de enfermedades infecciosas.
Por ello, los Centros de IA deben efectuar controles periódicos a los
toros dadores de semen para que los mismos estén libres de enfermedades
infecciosas.
El
resultado de la inseminación artificial (IA) es la consecuencia de una serie de
eventos concatenados. Cuando se
inseminan hembras fértiles, con una condición corporal adecuada, el programa de
IA resultará exitoso si se cuenta con un sistema de detección de celos
eficiente, si se utiliza semen de buena calidad y si la técnica la ejecutan
inseminadores avezados.
En
este trabajo, se hará referencia exclusivamente a uno de los aspectos
señalados: la calidad seminal
La
premisa a tener en cuenta cuando se evalúa semen es que no existe ningún examen
in vitro que esté altamente
correlacionado con la fertilidad. Existen
sí diversas pruebas de laboratorio para “estimar” la calidad del semen que son
extremadamente útiles si son realizadas correctamente e interpretadas con
criterio.
Un
hecho a tener en cuenta es que el semen congelado no es un producto uniforme,
esto se debe a dos razones fundamentales:
1-
Existe un rango de cierta amplitud entre los valores mínimos requeridos para
liberar una partida de semen congelado al mercado y un semen de alta calidad.
Durante
años, los organismos gubernamentales de nuestro país y de los países
tradicionalmente exportadores de semen, establecieron exigencias para asegurar
que los toros residentes en los Centros de Inseminación Artificial estén libres
de enfermedades y por consiguiente que el semen congelado no sea portador de
agentes patógenos. En cambio, no se
establecieron exigencias mínimas respecto a características del semen tales
como: viabilidad post-descongelación, anormalidades o número de espermatozoides
con motilidad progresiva por dosis.
Estas surgieron de la propia industria como una forma de garantizar
calidad.
En
los últimos años, se establecieron normas ISO 9002 de calidad para los Centros
de Inseminación Artificial, contemplando exigencias mínimas respecto a los
parámetros antes señalados. Dichas
exigencias no son altas, al menos para la viabilidad post-descongelación, por
lo tanto las diferencias de calidad en el semen existente en el mercado
actualmente, posiblemente se reduzcan pero como es lógico de esperar no
desaparecerán.
2-
Aunque se parta de un semen de alta calidad, la viabilidad de los
espermatozoides puede verse afectada durante la distribución y el
almacenamiento, si en estas etapas no se realiza un cuidadoso manejo del
producto.
Esta
observación no se debe pasar por alto porque muchas veces la evaluación de
dosis de semen congelado arroja resultados que desaconsejan su utilización y
los mismos se atribuyen erróneamente al proceso de elaboración.
Teniendo
en cuenta lo enunciado hasta aquí, a nadie le quedarán dudas de que el
porcentaje de preñez a primoinseminación es el mejor indicador de la
fertilidad. No obstante para hacer una
interpretación correcta de los resultados de la IA, hay que tener en cuenta que
la fertilidad de los rodeos varía aún durante períodos cortos. Esto quedó evidenciado claramente en un
trabajo donde se evaluó durante 5 meses consecutivos, el porcentaje de preñez a
primoinseminación obtenido en un mismo tambo y con un mismo inseminador, con
una partida de semen congelado de calidad excelente, elaborada a partir de dos
eyaculados de un mismo toro. Dicho
parámetro osciló entre 40 % y 84,6%.
Para
evaluar semen resulta esencial contar con un microscopio de calidad,
preferentemente con adaptación para contraste de fase, una platina térmica y un
baño María. Según Barth, en la
evaluación del semen congelado se deben tener en cuenta al menos 3 parámetros
básicos. Ellos son:
-
Viabilidad post-descongelación.
-
Morfología.
-
Número de espermatozoides con motilidad progresiva por dosis inseminante.
Algunos
investigadores consideran conveniente realizar controles bacteriológicos y/o
virológicos a espacios de tiempo variables según el caso . Barth recomienda
determinar la presencia de microorganismos patógenos únicamente cuando hembras
fértiles fracasan en ser preñadas con semen de buena viabilidad y morfología,
en dosis adecuada o cuando una historia de infertilidad implica una posible
causa infecciosa. En nuestro
laboratorio efectuamos de rutina un control bacteriológico a partir del momento
que registramos un caso donde un semen que había superado la evaluación de los
parámetros básicos, pero que tenía un elevado grado de contaminación con
gérmenes inespecíficos, afectó seriamente la fertilidad de un lote de
vaquillonas inseminadas.
Se
determina mediante el porcentaje de espermatozoides con motilidad progresiva y
el vigor espermático. Es recomendable
efectuar además, un examen directo del acrosoma.
El
daño a la membrana puede no ser completamente expresado inmediatamente después
de la descongelación. Por ello, el
semen debe ser incubado a 37º C durante 2 horas. Esta evaluación es conocida como prueba de termorresistencia o de
incubación.
Esta
prueba puede ser realizada de distintas formas. En nuestro laboratorio normalmente descongelamos 2 pajuelas de la
misma partida simultáneamente. A la
hora 0, vaciamos el contenido de una de ellas en un tubo de vidrio que contiene
un volumen de solución fisiológica equivalente al de la pajuela, procediendo de
inmediato a evaluar la motilidad progresiva y el vigor espermático. La otra pajuela permanece en el baño María y
es diluida en el momento de efectuar las determinaciones correspondientes a la
hora 2.
Las
pastillas se diluyen en 1 ml de solución fisiológica y el semen se mantiene
tapado dentro del baño en un tubo de vidrio neutro.
a) Examen de motilidad: el porcentaje de motilidad
progresiva y el vigor son determinados inmediatamente después de descongelado
el semen y luego de 2 horas de incubación.
Diversos
métodos pueden ser utilizados para determinar motilidad. Cuando se cuenta con experiencia,
generalmente se realizan estimaciones visuales rápidas, sin efectivamente
contar células.
Una
gota de semen delgada y uniforme es colocada entre porta y cubreobjeto tibios
procediendo a evaluar a 100 aumentos el porcentaje de espermatozoides con
motilidad progresiva y luego, la tasa de progresión (vigor). Esta, puede ser cuantificado utilizando la
siguiente escala:
0= sin movimiento.
1= ligera ondulación o vibración de cola, sin
progresión.
2= progresión lenta, incluyendo detención y
comienzo de movimiento.
3= movimiento progresivo continuo y moderada
velocidad.
4= movimiento progresivo, rápido.
5= movimiento progresivo muy rápido, en el
cual las células son difíciles de seguir visualmente.
El
semen de buena calidad, que ha sido recientemente descongelado, normalmente
tiene 40-50% de espermatozoides con motilidad progresiva y un vigor de
3-4. Después de 2 horas de incubación,
estos valores generalmente disminuyen un 10- 15% y 1 punto, respectivamente.
Las
normas mínimas para motilidad exigidas en nuestro laboratorio son las definidas
por el Departamento de Medicina del Rodeo y Teriogenología de la Universidad de
Saskatchewan, Canadá y que se corresponden con las de las normas ISO 9002. Ellas son:
0 hs= 25% de espermatozoides con motilidad
progresiva. Vigor 3.
2 hs= 15% de espermatozoides con motilidad
progresiva. Vigor 2.
En
los últimos años han sido introducidos análisis por sistemas de computación,
los cuales proporcionan un método objetivo de determinación de la motilidad
espermática . Una cámara de circuito cerrado de televisión, montada sobre un
microscopio alimenta información a un sistema de computación, el cual entrega
inmediatamente el porcentaje de motilidad progresiva, el vigor, la concentración
espermática y el número de espermatozoides móviles por mililitro.
El
costo del equipamiento para este sistema es muy alto y no ofrece ventajas para
predecir la fertilidad en forma más acabada que los métodos tradicionales
b) Porcentaje de acrosomas intactos: la determinación del porcentaje de acrosomas intactos es
un método morfológico de medición de la viabilidad post-descongelación, el cual
tiene correlación con la fertilidad. Es
un valioso complemento de la motilidad, para determinar la viabilidad y
fertilidad potencial del semen congelado.
Para
examinar el acrosoma, el movimiento de los espermatozoides debe ser
detenido. Esto se logra mezclando el
semen con glutaraldehido bufferado al 0,2%, que fija las membranas y previene
su deterioro posterior. La preparación
puede ser hecha sobre el portaobjeto, colocando una pequeña dosis de semen
próxima a una gotita de glutaraldehido mezclándolas bien y colocándoles un
cubreobjeto. Doscientas células deben
ser examinadas a 1000 aumentos, inmediatamente después de descongelado el semen
y luego de 2 horas de incubación. Los
valores mínimos para una clasificación satisfactoria son:
0 hs= 50% de acrosomas intactos.
2 hs= 35% de acrosomas intactos.
Otra
prueba que se utiliza para determinar integridad de membrana es el Test de
resistencia osmótica. El semen es
incubado, 2 hs a 37º C, en una solución hipoosmótica de fructosa y citrato de
sodio. Se realizan observaciones
seriadas (horas 0, 1 y 2) entre porta y cubreobjeto, determinándose el
porcentaje de espermatozoides vivos.
Estos reaccionan al shock osmótico enrollando la cola. Debe haber como mínimo un 40% de
espermatozoides reaccionantes.
La
viabilidad post-descongelación es el parámetro más importante y generalmente
aparece comprometida en aquellos casos donde se ha producido algún
inconveniente en la conservación del semen.
En el Servicio de Evaluación de Semen que funciona en nuestra Facultad,
periódicamente se registran casos en que se solicita dicha evaluación al
comprobarse que, por descuido o accidente, el termo ha quedado sin nitrógeno
líquido por algún período más o menos prolongado. También hemos comprobado que la viabilidad post-descongelación
suele verse afectada en aquellos casos en que el análisis revela un elevado
grado de contaminación con microorganismos inespecíficos que si bien son
incapaces de provocar una enfermedad reproductiva, pueden afectar la viabilidad
de los espermatozoides al competir con ellos por el oxígeno y los nutrientes.
La
coloración de eosina-nigrosina es ideal para evaluar la morfología espermática
dado que al carecer de pasos de lavado, todo lo que está en el semen se
descubrirá en el frotis.
El
concepto de defectos primarios y secundarios sirve bien para evaluar la aptitud
reproductiva de un toro pero no para predecir la fertilidad de cierta partida
de semen congelado. Cabe recordar que
por definición, un defecto primario es aquel que se origina durante la
espermatogénesis dentro del testículo y un defecto secundario, el que se
origina dentro del epidídimo o en el laboratorio.
Blom,
citado por Barth, introdujo un sistema de clasificación en defectos mayores y
menores. Un defecto mayor es aquél que,
presente en gran número, ha sido asociado con infertilidad. Los defectos menores son desviaciones que
hasta ahora no han sido asociadas con infertilidad. Este sistema de clasificación es abierto y deberá ser modificado
a medida que avance el conocimiento.
Una
nueva clasificación en defectos compensables y no compensables fue propuesta
por Saacke y col. Los espermatozoides con defectos compensables son aquellos
incapaces de alcanzar el oviducto o de participar del proceso de fertilización.
Tales espermatozoides tendrían poco efecto sobre la fertilidad, si se insemina
con un número suficiente de espermatozoides aptos. En cambio, los
espermatozoides con defectos no compensables (cráteres y vacuolas nucleares
-defecto diadema-) acceden al óvulo como los espermatozoides normales, son
capaces de penetrar la zona pelúcida desencadenar la reacción cortical
impidiendo la entrada de otros espermatozoides. La presencia de este tipo de
defectos suele ser la causa de baja fertilidad dado que, luego de la
fertilización, se desarrollan embriones de mala calidad que mueren durante los
primeros días de gestación.
Si
bien cada nueva clasificación parece más apropiada que la anterior, cuando se
evalúa la morfología espermática siempre surgen interrogantes tales como:
¿Qué tipo de modificación en la estructura de
los espermatozoides es realmente una anormalidad y si constituye una causa
significativa de infertilidad?
¿Qué
nivel de anormalidad es tolerable?
Un
conteo de 100 células es satisfactorio cuando no existen problemas mayores.
Cuando un gran número de defectos espermáticos está presente, hasta 500 células
deben ser contadas para obtener un espermograma preciso. Se exige un 70% de células normales.
Con
las colocaciones más comunes que se utilizan habitualmente en los laboratorios
es difícil detectar alteraciones en la morfología espermática que no se vean
reflejadas en parámetros más sensibles como lo es por ejemplo, la viabilidad
post-descongelación
Surge
de multiplicar el número de espermatozoides totales por el porcentaje de
espermatozoides con motilidad progresiva a la hora 0 pos descongelación.
Existen
al menos 4 formas distintas de determinar el número de espermatozoides. En
nuestro laboratorio, se utiliza el método hemocitométrico
Un
criterio vigente durante años, basado en la definición de pubertad, indicaba
que la dosis inseminante no debía ser inferior a 10 millones de espermatozoides con motilidad progresiva. Cuando
el semen congelado en pastillas dominaba el mercado de la IA en nuestro país,
esta cifra era superada con creces dado que las pastillas generalmente tenían
40 millones de espermatozoides, oscilando el porcentaje de motilidad progresiva
generalmente entre un 30 y 40 %.
La
descongelación de pajuelas, por tratarse de un proceso automatizado con tasas
de enfriamiento estrictamente controladas, significó un gran avance. Al
resultar menos traumáticos los procesos de congelación y descongelación fue
posible disminuir de manera significativa el número de espermatozoides
contenidos en cada dosis de semen.
La
situación actual, caracterizada por una alta competencia, hace que cada Centro
de Inseminación Artificial quiera obtener el máximo provecho de sus
reproductores, sacando mayor cantidad de dosis de cada eyaculado. Esto es común
de observar en el semen de toros de alto valor genético de razas lecheras,
donde el número de espermatozoides por dosis se ajusta de acuerdo a los datos
de no retorno que los Centros reciben periódicamente.
Las
normas ISO 9002 establecen que la dosis inseminante debe tener un mínimo de 8
millones de espermatozoides con motilidad progresiva. Este número puede reducirse a 6 millones si el semen posee más de
30% de espermatozoides con motilidad progresiva y si la tasa de anormalidades
es inferior al 25% o si, el porcentaje de no retomo 60/90 de 300
primoinseminaciones resulta equivalente al obtenido con 8 millones.
A
los efectos de una correcta interpretación de los análisis de laboratorio, se
debe tener presente que la evaluación del porcentaje de espermatozoides con
motilidad progresiva es subjetiva y que los toros difieren en el porcentaje en
el que expresan su máxima fertilidad. Al mismo tiempo, hay que recordar que por
más que se establezcan valores mínimos de referencia, no es conveniente ceñir
eventos biológicos a la más pura matemática.
La
IA tiene como objetivos mejorar la calidad genética y también prevenir o
eliminar enfermedades venéreas. Sin
embargo la técnica no está exenta de riesgos, pues puede convertirse en vía de
diseminación o en fuente de propagación de enfermedades infecciosas a nivel
nacional e internacional.
El
semen criopreservado es un excelente mecanismo de control sanitario si se
tienen en cuenta las siguientes premisas:
-
Es necesario determinar el estado sanitario de los sementales utilizados como
dadores.
-
El semen puede vehiculizar bacterias, virus, hongos patógenos u oportunistas.
-
La mayoría de estos microorganismos sobreviven al proceso de congelación y a
los antibióticos que se añaden al diluyente.
-
Es posible controlar el eyaculado previo y a posterior de la congelación, para
determinar la presencia de gérmenes citados anteriormente.
-
De un eyaculado se obtienen generalmente muchas dosis de semen, por lo que el
riesgo de diseminación de enfermedades en diferentes rodeos el elevado.
-
En IA el semen es depositado en útero, por lo tanto, no es expuesto a los
efectos bactericidas de las secreciones del cuello uterino y de la vagina
durante el estro.
Para
cumplir con las premisas señaladas, los Centros de IA deben efectuar cuarentena
a los reproductores previo a su ingreso y controlar periódicamente que los
mismos estén libres de enfermedades infecciosas. El personal debe estar debidamente entrenado siendo necesario
adoptar medidas de higiene que permitan la obtención de pajuelas y/o pastillas
de calidad.
En
Argentina, antes de ingresar a un Centro de IA, todo reproductor debe
permanecer aislado durante 60 días de los toros residentes. Se realizan controles durante el período de
cuarentena y posteriormente se llevan a cabo controles semestrales para asegurar
que los reproductores estén libres de brucelosis, tuberculosis,
paratuberculosis, leptospirosis, campilobacteriosis genital bovina,
trichomoniasis, rinotraqueitis infecciosa bovina, diarrea vírica
bovina/enfermedad de las mucosas, leucemia bovina, de acuerdo con la
metodología descripta posteriormente.
-
Controles durante el período de cuarentena
Tuberculosis: se efectúa una intradermoreacción con PPD
bovina a los 50 días de haber ingresado el animal al período de cuarentena.
Brucelosis: se realizan dos pruebas
serológicas, por el método de BPA, como prueba tamiz y posteriormente pruebas
complementarias de Wright y 2 mercaptoetanol, y dos pruebas de Huddleson en
plasma seminal negativas, efectuadas cada una de ellas con un intervalo de 45 a
60 días.
Leptospirosis: se debe efectuar un control
serológico mediante la prueba de Martín y Pettit, se acepta un título de hasta
1/200.
Trichomoniasis: se deben realizar cuatro
controles negativos, con intervalos de 7 días por cultivo de material
prepucial.
Campilobacteriosis: se efectúan cuatro controles negativos por
inmunofluorescencia directa de material prepucial, con intervalos de 7 días.
- Controles para la exportación
de semen
Además
del control de las enfermedades de rutina, se realizan análisis para:
Paratuberculosis: test de ELISA o cultivo de
materia fecal con resultado negativo.
Aftosa: se procesan 2 muestras por
partida de semen a exportar, para aislamiento viral.
rinotraqueitis infecciosa
bovina: se
procesan 2 muestras por partida de semen a exportar, para aislamiento viral.
Diarrea viral bovina: se procesan 2 muestras por
partida de semen a exportar, para aislamiento viral.
En
caso de ser solicitado por el país importador se realiza también diagnóstico de
leucemia bovina y lengua azul.
Leucemia bovina: dos pruebas de inmunodifusión en
gel de agar con resultado negativo, separadas 60 días.
Lengua azul: una prueba de inmunodifusión en
gel de agar con resultado negativo.
- Recomendaciones para la
importación y exportación de semen
La
Oficina Internacional de Epizootias (OIE) efectúa las siguientes
recomendaciones:
El
semen debe provenir de países o territorios libres de aftosa, peste bovina y
pleuroneumonía contagiosa. Los animales
del Centro de IA deberán estar libres de brucelosis y tuberculosis y los toros
dadores y el semen deberán estar libres de lengua azul y de las enfermedades
que se controlan periódicamente en los Centros de IA.
Eaglesome
y García proponen una clasificación de las enfermedades según el riesgo de
transmisión en IA (Cuadro 1)
Cuadro 1: Riesgo de transmisión de
enfermedades del bovino en inseminación artificial
|
Categoría |
Enfermedad |
Presencia del agente |
Lista de enfermedades OIE |
|
1 |
Enfermedades con
evidencia de riesgo alta o moderada |
||
|
Brucelosis bovina |
+ |
B |
|
|
Campilobacteriosis genital bovina |
+ |
B |
|
|
Diarrea vírica bovina
|
+ |
- |
|
|
Estomatitis vesicular
|
+ |
A |
|
|
Fiebre aftosa |
+ |
A |
|
|
Haemophilus somnus |
+ |
- |
|
|
Mycoplasmosis |
+ |
- |
|
|
Rinderpest |
+ |
A |
|
|
Rinotraqueitis infecciosa bovina |
+ |
B |
|
|
Trichomoniasis |
+ |
B |
|
|
Tuberculosis bovina |
+ |
B |
|
|
Ubicuitarios (e.j. Pseudomona aeruginosa,
Escherichia coli) |
+ |
||
|
1 |
Enfermedades de bajo riesgo de
transmisión |
||
|
Lengua azul |
+ |
A |
|
|
Leucemia bovina |
+ |
B |
|
|
Fiebre efímera bovina |
NR |
- |
|
|
Virus Akabane |
+ |
- |
|
|
Leptospirosis |
+ |
B |
|
|
2 |
Enfermedades con
pequeña o ninguna información de riesgo de transmisión |
||
|
a) Transmisión probable a través de
inseminación artificial |
|||
|
Inmunodeficiencia bovina |
+ |
- |
|
|
Paratuberculosis bovina |
+ |
B |
|
|
Pleuroneumonía contagiosa bovina |
+ |
A |
|
|
b)Transmisión improbable a través de
inseminación artificial |
|||
|
Lumpy skin disease |
+ |
|
|
|
Fiebre del Valle del Rift |
NR |
A |
|
|
Fiebre Q |
+ |
B |
|
|
Rabia |
NR |
- |
|
|
Septicemia hemorrágica |
NR |
B |
|
|
Fiebre catarral maligna |
NR |
B |
|
|
Encefalopatía espongiforme bovina |
NR |
B |
|
|
Listeriosis |
+ |
- |
|
|
Anaplasmosis |
NR |
B |
|
|
Babesiosis |
NR |
B |
|
|
Chlamydia |
+ |
- |
|
|
Hongos, levadura |
+ |
- |
|
|
+: Presencia del agente infeccioso
en semen; NR: No reportado |
|||
1.
Rinotraqueitis infecciosa bovina
El
BHV-1 replica en la mucosa del prepucio, pene y parte distal de la uretra. Cuando se produce reactivación viral, se
excreta virus por semen. En este caso,
puede o no haber respuesta sérica y el virus puede estar presente en semen, sin
que el animal manifieste signos clínicos de enfermedad.
Los
toros liberan virus durante la fase aguda y también durante la infección
latente, pudiendo el semen infectarse por infección local primaria del
prepucio, con posterior producción de anticuerpos neutralizantes. Animales con infección latente pueden tener
títulos muy bajos o ser seronegativos, principalmente cuando no se producen las
causas predisponentes para la reactivación viral. La infección del tracto genital primario puede inducir baja
respuesta o ninguna. En ensayos
realizados, semen de toros seropositivos a BHV-1 puede estar libre de virus
cuando los toros son apropiadamente manejados con escasas situaciones
estresantes.
Diagnóstico.- de rutina para semen se realiza
aislamiento viral e identificación en cultivos celulares de origen bovino. Experimentalmente, se puede realizar identificación
del virus en semen por PCR. En Centros
de IA es preferible usar toros seronegativos y extraer muestra de sangre a los
reproductores para efectuar pruebas serológicas 21 días después de la
recolección de semen. Además, se deben
analizar por lo menos 2 pajuelas porque el semen es diluido antes de congelar y
no todas las pajuelas necesariamente pueden contener virus.
2.
Enfermedad de las mucosas- Diarrea viral bovina
El
BVDV es excretado en semen de toros durante la fase aguda, en la infección transitoria
y también en reproductores persistentemente infectados (PI).
Diagnóstico.- de rutina se realiza fijación de
complemento, inmunoflorescencia indirecta y seroneutralización para medir
anticuerpos. Para determinación del
agente se realiza aislamiento viral, ELISA con antígeno de captura y PCR
transcriptasa reversa. El mejor método
para identificar PI es la examinación virológica y dos muestras de sangre con 4
semanas de diferencia.
3.
Brucelosis
Las
brucelas en toros pueden localizarse principalmente en vesículas semanales,
ampolla, testículos y epidídimo. Los
reproductores infectados pueden ser serológicamente positivos o negativos,
pudiendo aislarse brucelas en semen.
Diagnóstico.- se considera que para ingreso a
un Centro de IA, las pruebas de aglutinación serían suficientes, pero teniendo
en cuenta lo dicho anteriormente, sería beneficioso procesar el semen para
aislamiento y aglutinación del plasma seminal, particularmente en toros
provenientes de áreas de riesgo.
4.Leptospirosis
En
bovinos produce infertilidad, aborto temprano y tardío. La serovar harjo ha sido aislada de vesícula seminal, epidídimo, y testículo
de animales naturalmente infectados. Lesptospira spp ha sido aislada de semen
de toros naturalmente y experimentalmente infectados, siendo reportada la
transmisión seminal. Leptospira
sobrevive en extendidos de semen no congelado con o sin antibióticos.
Diagnóstico.- la prueba de laboratorio de
referencia en leptospirosis es la microaglutinación. Se han desarrollado también enzimainmunoensayos para detección de
antígenos y anticuerpos. En semen han
sido reportadas dificultades para el aislamiento de leptospiras en toros
experimentalmente infectados. Se están
desarrollado pruebas moleculares para su detección e identificación.
5. Campilobacteriosis genital bovina.- El toro es portador
asintomático de la enfermedad y no presenta modificaciones en las
características del semen. La
incidencia en los toros aumenta con la edad.
Se localiza en la mucosa prepucial y en la mucosa del glande. Puede ser transmitido a la hembra a través
del servicio natural o artificial.
Diagnóstico.- de rutina se realiza
inmunoflorescencia directa del esmegma prepucial en la cuarentena previa al
ingresar al Centro de IA. Luego,
controles semestrales. También se puede
realizar cultivo de semen fresco y congelado para aislamiento e
identificación. En la actualidad se ha
de desarrollado un análisis por PCR para detectar cantidades muy bajas por
mililitro de semen diluido de toros experimentalmente infectados.
6. Trichomoniasis
Al
igual que campilobacteriosis, el toro se comporta como portador asintomático de
la enfermedad y tampoco interfiere en la espermatogénesis, ya que se encuentra
en el esmegma prepucial. El parásito
puede sobrevivir en semen diluido y soportar la congelación, sin embargo la
transmisión de la infección por IA no ha sido reportada.
Diagnóstico.- de rutina se realiza cultivo de
esmegma prepucial en medios apropiados, durante la cuarentena del reproductor
previo al ingreso al Centro de IA.
Posteriormente se realizan controles semestrales. También se puede realizar cultivo de semen
fresco y congelado para aislamiento, considerando que los antibióticos
presentes en semen congelado no afectan el protozoo. Un prueba DNA específica y sistema de amplificación PCR han sido
también utilizados para detectar Tritrichomonafoctus
en esmegma prepucial.
7.Haemophilus somnus
En
nuestro país no existen datos de prevalencia de la enfermedad en los rodeos. Produce infecciones en el aparato reproductor
del macho y de la hembra, puede ser aislado de semen y de la cavidad prepucial
en toros, sin que estos presenten manifestaciones clínicas. En el tracto reproductor existen cepas
comensalistas, sin acción patógena, no pudiendo distinguirse de las cepas
virulentas. Los órganos urogenitales
son el reservorio del organismo, pudiendo transmitiese a la hembra a través del
semen infectado, siendo éste un mecanismo de difusión muy directo.
Diagnóstico.- se realiza aislamiento e
identificación. Inoculación
experimental en terneros para reproducción de la meningoencefalitis trombótica
causada por las cepas patógenas.
8. Chlamydia psittaci
Produce
infecciones en machos y hembras bovinas.
En la hembra causa placentitis, abortos, y mortalidad perinatal. En toros produce principalmente
vesiculitis. Storz, citado por
Eaglesome y García, hace referencia a la excreción de clamidias en semen de toros
con piospermia y a un alto porcentaje de espermatozoides con morfología anormal. Bicknell y col. citan aislamientos en toros
clínicamente normales y con semen de calidad satisfactoria. Cuando el microorganismo hace septicemia,
las clamidias se liberan por semen en forma intermitente, durante
aproximadamente 3 semanas. Los toros
pueden permanecer como portadores con o sin presencia de anticuerpos séricos.
Diagnóstico: se realizan colocaciones para
determinar cuerpos elementales o inclusiones a partir de frotis, para posteriormente
realizar el aislamiento e identificación en cultivos celulares o huevos
embrionados. Se encuentran en
desarrollo técnicas de peroxidasa, enzimainmunoensayo y PCR utilizadas en Chlamydia trachomatis para
identificación de Chlamidya psittaci.
9. Patógenos potenciales y contaminantes del semen
La
presencia de ciertos microorganismos en el medio ambiente en que se encuentran
los toros dadores (cavidad prepucial, instalaciones, personal, etc.) pueden
actuar como patógenos potenciales del semen. Numerosos trabajos determinan la presencia de: Actinomyces pyogenes, Pasteurella
hemolyticum y multocida, Staphilococcus spp., Streptococcus spp., Pseudomonas
spp., Acinetobacter spp, Proteus spp., Escherichia coli, hongos, entre
otros. La presencia de microorganismos
en semen usados para IA es un tema controvertido por los diferentes efectos de
su presencia en relación con la fertilidad y/o el desarrollo embrionario. Al respecto, las normas ISO 9002 y la OIE
recomiendan que debe haber menos de 500 unidades formadoras de colonias (UFC)
por pajuela. Para el control de los
gérmenes oportunistas se recomienda: higiene en la extracción y recolección del
semen, uso de material estéril, control de termos y nitrógeno líquido.
Diagnóstico: se realiza por aislamiento e
identificación de los diferentes géneros bacterianos a partir del semen fresco
o congelado.
En
la Facultad de Ciencias Veterinarias siempre que se recibe semen para analizar
se destina una dosis del mismo al Laboratorio de Microbiología Clínica y
Experimental. La muestra se procesa
siguiendo las recomendaciones del Comité para la Examinación Microbiológica del
Semen de la Asociación Americana de Laboratorios de Diagnóstico Veterinario.
Se
investiga la presencia de patógenos de la reproducción tales como: Brucella spp, Campylobacter fetus, Listeria monocitógenes, Haemophilus somnus,
Tritrichomona foetus, Chlamydia spp
y Leptospira spp. y de otros
patógenos tales como Mycobacterium bovis
y Mycobacterium avium paratuberculosis.
También
se investiga la presencia de oportunistas tales como Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulase negativo, Pseudomonas ssp, Escherichia col¡,
Acinetobacter spp, Actinomyces spp, Proteus vulgaris, Corynebacterium spp. entre
otros, hongos y levaduras.
En
los casos en que hubo desarrollo bacteriano, predominaron gérmenes oportunistas
tales como Pseudomonas spp,
Staphilococcus SPP, Acinetobacter
calcoacéticus, Staphilococcus spp., Corynebacterium spp., Mycobacterium spp y hongos. También se aisló Haemophilus somnus en una
muestra y se detectaron 3 muestras positivas a Chlamydia spp por una prueba inmunoenzimática.
En
los últimos años hemos observado una disminución en el porcentaje de muestras
con un número alto de UFC (>10.000). De 9,3% en el 97, declinó a 5,5% en el
98 y a un 3% en lo que va del corriente año.
Este hecho, puede deberse a las siguientes razones:
1
- En un principio, nuestro servicio era requerido cuando se detectaba algún
problema luego de la inseminación, mientras que actualmente la mayoría de los
colegas solicitan evaluar el semen antes de comenzar la inseminación.
2- En las muestras que se reciben, día a día
aumenta la proporción de pajuelas. Es
conocido que en esta forma de presentación el grado de contaminación es menor.
Las
pruebas de laboratorio disponibles hoy en día no determinan si los
espermatozoides cuentan con todos los atributos necesarios para llevar a cabo
la fertilización. No obstante, la
sumatoria de la información que cada una de ellas brinda, correctamente
interpretada, permite efectuar una predicción de la fertilidad potencial de un
determinado semen.
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